低离子聚凝胺介质交叉配血试验可检出血浆中IgM类抗体和IgG类抗体,但对Kell血型系统的抗体检测不理想。
首先利用低离子强度溶液(low ionic-strength solution,LISS)降低溶液的离子强度,减少红细胞周围的电子云,促使血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合。再加入聚凝胺溶液,带正电荷的聚凝胺大分子聚合物能够中和红细胞表面的负电荷,减弱红细胞间的静电斥力,缩短红细胞间的正常距离,在离心力作用下,可使正常红细胞形成可逆性的非特异性聚集。然后加入枸橼酸钠解聚液,枸橼酸根的负电荷能中和聚凝胺的正电荷,由聚凝胺引起的非特异性聚集会因电荷中和而消失,为阴性反应,而由抗体介导的特异性凝集则不会消失,出现肉眼可见的凝集现象,为阳性反应。
LISS、聚凝胺溶液、枸橼酸钠解聚液。
制备血浆和3%红细胞悬液→取4支试管,分别标记主侧、次侧、阳性和阴性对照管→主侧管加100μl受血者血浆和50μl供血者红细胞悬液,次侧管加100μl供血者血浆和50μl受血者红细胞悬液,阳性管加100μl抗-D血清和50μl RhD阳性红细胞悬液;阴性管加100μl AB型血清和50μl RhD阳性红细胞悬液→每管加LISS 0.6ml,混匀,室温孵育1分钟→每管加50μl聚凝胺溶液,混合后室温静置15秒→1 000 × g离心15秒,弃去上清液→轻摇试管,目测红细胞有无凝集,如形成凝块,进行下一步试验;如无凝集,必须重做前面试验→每管加入50μl枸橼酸钠解聚液→观察结果:1分钟内,轻轻摇动试管,肉眼观察凝块是否散开,必要时用显微镜观察结果。
(1)相容
阳性对照管凝集不消失,阴性对照管凝集消失。如果主侧管和次侧管内红细胞凝集在1分钟内散开,则为聚凝胺介质交叉配血试验阴性,表示供血者和受血者血液聚凝胺介质交叉配血相容。
(2)不相容
阳性对照管凝集不消失,阴性对照管凝集消失。如果主侧管和次侧管或单独一侧试管内红细胞凝集不散开,则提示受血者、供血者血液聚凝胺介质交叉配血不相容。
(1)方法
在交叉配血时,应首先进行盐水介质试验,排除IgM类红细胞血型完全抗体的存在后,再进行聚凝胺介质交叉配血试验。
(2)标本
如血液透析患者样本做交叉配血,因为标本中有肝素,建议改用抗球蛋白进行交叉配血试验,从而保证试验的准确可靠性,确保患者安全输血,避免发生输血反应。
(3)试剂
聚凝胺只能使正常红细胞发生凝集,对缺乏唾液酸的细胞(如T及Tn细胞)无作用。聚凝胺溶液放置在玻璃瓶中过久可能引起红细胞凝集减弱,因此,该溶液应保存在深色或黑色塑料瓶中。
(4)操作
在试验过程中加样量不准,反应时间不足,离心力不够及看结果时振摇过重都会造成阳性结果减弱。因此,试验操作人员要严格按照试剂使用说明书进行操作。
(5)结果观察
①加聚凝胺溶液离心后,弃上清前应先观察上清液是否有溶血;②弃上清后,肉眼观察凝集时,摇动试管时动作要轻,否则,可使凝集红细胞散开;③加入枸橼酸钠解聚液后,应轻轻摇动试管,并在1分钟内立即观察结果,以免反应减弱或消失;④凝集结果不明显时,可用显微镜观察。