检测粪便还原糖及pH:取材方便,操作简便可作为首选,最好两者同时检测,有助于提高LM的阳性率。
用Clinitest试剂检查粪便中的还原糖是国际上公认的测定婴幼儿LM的初筛试验。虽然麦芽糖、乳糖、葡萄糖、半乳糖、果糖均属还原糖,但因婴儿的主食为乳糖,故在婴儿粪便中出现的还原糖可推论为由于LM而排出的乳糖。
其原理为乳糖中的半缩醛羟基与醋酸铅加热后,在碱性环境下产生白色的Pb(OH)2沉淀。方法;用新鲜粪便2g加水5ml,充分搅拌,静置后取出沉渣,取上清液加入试管中,再加入醋酸铅0.3g搅拌,溶解后,加热煮沸1分钟;再加入7.14mol/L氢氧化铵2ml,溶液立即变成白色沉淀,继续加热沸腾3分钟,静置,根据沉淀的量、颜色评定结果。醋酸铅法粪便乳糖评定标准见表1。
表1 醋酸铅法粪便乳糖评定标准
注:≥++作为乳糖吸收不良的指标
配方如下:将硫酸铜17.3g溶解于100ml热蒸馏水中。取枸橼酸钠85g及碳酸钠50g溶于700ml蒸馏水,加热助溶,冷却后将硫酸铜溶液缓慢倾入枸橼酸钠和碳酸钠溶液中,边加边搅匀,最后加蒸馏水至1000ml。操作方法:取新鲜粪便1g加入2ml蒸馏水,充分搅匀,用普通离心机3000r/min离心3分钟,再取上清液0.5ml加入改良班氏试剂0.5ml混匀后观察反应。改良班氏试剂法粪便还原糖测定标准见表2。
表2 改良班氏试剂法粪便还原糖测定标准
注:粪还原糖>(+)为检测阳性,阳性者诊断为还原糖吸收不良
醋酸铅法、改良班氏试剂法、班氏试剂法试用初期均与Clinitest试剂作过对照,经统计学处理均无显著差异,醋酸铅法还与粪便纸层析法作过对照,凡醋酸铅法阳性粪便,纸层析法均在乳糖部位显影。改良班氏试剂、班氏试剂的成分与作用机制均与Clinitest试剂相似,即还原糖分子中的醛基或酮基在碱性溶液中能使带蓝色的二价铜离子(Cu2+)生成不溶性的橘红色沉淀。因而如果没有Clinitest试剂时,可用上述三种试剂检测粪便中的还原糖。