在血液内可查见许多的寄生虫，通过血液检查或骨髓检查即可进行确诊，常见的有：疟原虫、血丝虫、螺旋体、弓形体等。

1. 取血

用75%酒精棉球消毒患者耳垂或指尖，右手持采血针，刺破皮肤，挤出血滴。血膜应尽快制作，以防凝固。对于检查疟原虫，现症患者一般可随时取血，间日疟原虫宜在发作后数小时采血，恶性疟在发作初期采血可见大量环状体，1周后可见配子体。对于检查微丝蚴，宜在晚间9时到次晨2时取血。

2. 涂片

（1）新鲜血片：主要用于微丝蚴的检查。自耳垂或指尖采血一滴置于载玻片上，加一滴水溶血稀释，加盖片，在低倍镜下观察，发现蛇形游动的幼虫后，仍需做染色检查，以确定虫种。

（2）薄血膜涂片：取一洁净载玻片，在其中部蘸血一小滴（约1μl）。左手持该片两端边缘，右手持另一洁净载片为推片，要求边缘光滑（最好为磨口边缘），将推片的一端中央置于血滴之前，使两载玻片之间的角度为30°～45°，待血液沿推片边缘扩散后，自右向左推成薄血膜。推片时用力要均匀，速度要适中，切勿中途停顿。两片夹角要适宜，过小血膜太薄，过大血膜太厚，都不利于观察。理想的薄血膜，应是一层均匀分布的血细胞，血细胞间无空隙且不重叠，血膜末端呈扫帚状（图1）。

图1薄、厚血膜涂片法

（3）厚血膜涂片：如果检查疟原虫，可制作于同一薄血膜片上。在载玻片的右1／3处蘸血一小滴（约4μl），以推片的一角，将血滴自内向外作螺旋形涂开，使之成为直径约1cm，厚薄均匀的厚血膜，平置，自然晾干（不可加热干燥以免血红蛋白凝固而无法脱除）。厚血膜为多层血细胞的重叠，约等于20倍薄血膜的厚度，太厚则容易脱落，太薄则与薄血膜无明显差别。如果检查微丝蚴，在耳垂或指尖取血3大滴（60μl）置于载玻片上，用另一载玻片将血滴涂布成2cm×3cm大小的椭圆形血膜，应厚薄均匀、边缘整齐。平放、隔夜自然干燥。然后将血片插入水中溶血，待血膜呈现乳白色时取出晾干（图1）。

血涂片必须充分晾干，否则染色时容易脱落。固定时用小玻棒蘸甲醇或无水酒精在薄血膜上轻轻抹过。如薄、厚血膜在同一玻片上，应先将厚血膜溶血，再与薄血膜一同固定、染色。滴加蒸馏水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倒去，晾干。在稀释各种染液时，如用缓冲液则染色效果更佳。缓冲液的配制如表6‐3。

M／15磷酸氢二钠液：无水磷酸氢二钠9.64g，加蒸馏水至1000ml。

M／15磷酸二氢钾液：磷酸二氢钾9.07g，加蒸馏水至1000ml。使用时将上述原液按下表配制成pH为7.0或7.2的缓冲液。

表1常用缓冲液配制（单位：ml）

疟原虫血涂片常用的染色方法有姬氏染色（Giemsa’s stain）、瑞氏染色（Wright’s stain）和荧光素吖啶橙染色。对于检查微丝蚴，染色液可用瑞氏和姬氏染液，但为了更好地鉴别虫种，用德氏（Delafield）苏木素染液效果更好，苏木素染液是一种染细胞核的优良染色剂，并可使细胞中不同的结构呈现不同的颜色。

1. 姬氏染色法

染液配置：姬氏染剂粉1g，甲醇50ml，纯甘油50ml。将姬氏染剂粉置于研钵中（最好用玛瑙研钵），加小量甘油充分研磨，不断加甘油再磨，直至50ml甘油加完为止，研磨半小时以上，倒入棕色玻璃瓶中。然后用甲醇分次冲洗研钵中的染料，倒入玻璃瓶直至50ml甲醇用完为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置65℃温箱内24h备用。

染色方法：用pH7.0～7.2的磷酸盐缓冲液，按10∶1稀释姬氏染液；用蜡笔画出染色范围，将稀释的姬氏染液滴于已固定的薄、厚血膜上，染色30min（室温），再用上述缓冲液或自来水轻轻冲洗血膜，注意不可直接对着血膜冲洗。血涂片阴干后镜检。此法染色效果良好，血膜褪色较慢，保存时间较久，但染色时间较长。

2. 瑞氏染色法

染液配置：瑞氏染剂粉0.2～0.5g，甲醇97ml，甘油3ml。将瑞氏染剂加入甘油中充分研磨，然后加少量甲醇，研磨后倒入棕色瓶内，再分几次用甲醇冲洗研钵中的染液，倒入瓶内，直至用完为止。充分摇匀，塞紧瓶口，置阴暗处。1～2周后过滤备用，或放入37℃温箱24h后过滤备用。

染色方法：瑞氏染剂含甲醇，薄血膜无须先固定。染色前先将溶过血的厚血膜和薄血膜一起用蜡笔画好染色范围，以防滴加染液时外溢。快速滴加足量的染液覆盖全部厚、薄血膜上，以防甲醇挥发，染液干涸在血膜上；30～60s后用滴管加等量的蒸馏水，轻轻摇动载玻片，使蒸馏水和染液混合均匀，此时出现一层灿铜色浮膜（为染色），3～5min后用水缓慢从玻片一端冲洗（注意勿先倒去染液或直对血膜冲洗），阴干后镜检。此法操作简便，适用于临床诊断，但血片较易褪色，保存时间不长，因此多用于临时性检验。

3. 德氏苏木素染色法

染液配制：取苏木精4g溶于纯酒精或95%的酒精10ml中，加硫酸铝铵（10%）100ml，倒入棕色瓶中，瓶口用两层纱布扎紧，在阳光下氧化2～4周，过滤，加甘油25ml和甲醇25ml，再过滤一次，保存备用。

染色方法：将德氏染液稀释10倍左右，将溶血、固定的厚血膜置于其内10～15min，在1%酸酒精中分色1～2min，蒸馏水洗涤1～5min，至血膜呈蓝色，再用1%伊红染色0.5～1.0min，以水洗涤2～5min，晾干后镜检。

4. 改良德氏苏木素染色法

染液配制：取苏木精用无水酒精配成10%（W／V）的溶液，将该溶液室温下放置1～2个月，使其充分作用，临用时，取10ml上述溶液，加饱和硫酸铝铵溶液100ml、甲醇25ml、甘油2ml混匀后即可用于染色。

染色方法：将干燥保存的血涂片放入蒸馏水中10～20min，以溶解细胞和去除结晶，取出玻片放入37℃温箱内干燥或在室温下自然干燥，将干燥后的玻片放入95%或无水酒精中固定30min后取出干燥，再将玻片放入上述苏木素染液中，染色12～24h，取出玻片，用自来水反复冲洗，去除染液。将玻片放入3%～5%的盐酸溶液中进行分色，其间不断在显微镜下观察，至微丝蚴体核鲜艳，鞘膜清晰时，用蒸馏水冲洗除酸。如果染色效果不满意可重复染色步骤。冲洗后的玻片充分干燥，置显微镜下观察。低倍镜下观察虫体分布均匀，体态自然，着色适中，与背景反差明显。高倍镜下观察虫体色泽鲜艳，鞘膜清楚，头间隙、体核、尾核、神经环清晰。

1. 活微丝蚴浓集法

取静脉血1ml，置于盛有0.1ml的3.8%枸橼酸钠的离心管中，摇匀，加蒸馏水9ml，待红细胞溶解后，再离心（3000r／min）2min，弃去上清液，加水再离心，取沉渣镜检。也可在离心管中加蒸馏水半管，加血液10～12滴，再加生理盐水混匀，离心（3000r／min）沉淀3min，取沉渣镜检。

2. 离心浓集法检查疟原虫

由于被疟原虫大滋养体、裂殖体和配子体寄生的红细胞密度变小，因此离心后被疟原虫寄生的红细胞浓集于正常红细胞的上层，故可用含抗凝剂的塑料管取血，经1500r／min离心3min，然后取上层血细胞制成血涂片，固定染色后镜检。但此法对环状体疟原虫无浓集作用。

3. QBC法检查疟原虫

QBC即定量血沉棕黄层分析法（quantitative buffy coat analysis），其原理是感染疟原虫的红细胞比正常红细胞轻，又比白细胞重，离心后分层，受染红细胞则集中于正常红细胞压积层和褐色层（从上到下依次为血小板层、淋巴细胞和单核细胞的混合物、粒细胞层）的交界处。

操作方法：指尖采血置于装有0.01%吖啶橙、草酸钾、肝素、乙二胺四乙酸（EDTA）和1个与白细胞密度相同的塑料浮标的特制毛细管中。置水平离心机10000r／min离心5min，离心后浮标自动定位于褐色层。将QBC管水平放在有凹口的专用板上，滴香柏油，用落射荧光显微镜检查1min。疟原虫胞核呈绿色光点，胞质则为橘黄或红色，多集中于白细胞与正常红细胞交界处约1mm的区带中。

QBC法的优点在于快速、敏感，可以检出低原虫血症，QBC法敏感性可达1个原虫／105RBC。但此方法需要使用荧光显微镜，且毛细管费用较高，虫种鉴别、计数困难，因此目前该法尚难以取代传统的厚、薄血膜镜检方法。