抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)是自身免疫性疾病患者血清中最常出现的一类自身抗体，ANA检测对于自身免疫性疾病的诊断具有重要意义。ANA传统上是指抗细胞核抗原成分(包括DNA、RNA、蛋白或这些物质的分子复合物)的自身抗体的总称。近年来ANA的概念有所扩大，是指抗真核细胞所有抗原成分(包括核酸、核蛋白、细胞骨架及胞质成分等)的自身抗体，抗体主要为IgG，也包括IgA、IgM、IgD和IgE，它们可与不同种属来源细胞的相应抗原成分发生反应。ANA主要存在于血液中，也可存在于胸水和关节滑膜液等体液中。ANA检测是许多自身免疫病诊断的首选筛查项目。

（一）间接免疫荧光法 

待测标本中的ANA与细胞底物片(如HEp-2细胞)的相应抗原发生抗原-抗体特异性反应，用缓冲液洗去未结合物，然后滴加荧光素标记的抗人免疫球蛋白抗体(又称抗抗体或二抗，通常为抗IgG抗体)，荧光二抗与底物细胞已结合的抗原-抗体复合物上的抗体分子再特异性结合，形成抗原-抗体-荧光二抗的免疫复合物，冲洗除去未结合的荧光二抗后，将底物片置于荧光显微镜下观察。在细胞底物片上，形成抗原-抗体-荧光二抗复合物的部位显示特异性荧光，提示待测标本中存在针对细胞相关抗原的自身抗体，即ANA阳性。

（二）ELISA法 

取HEp-2细胞粗抗原或纯化抗原的混合抗原包被ELISA板，即形成有结合能力的固相抗原，加入待测标本，标本中的ANA与固相抗原特异性结合，形成抗原-ANA复合物，洗去未结合物，然后加入酶标记的抗人免疫球蛋白抗体(又称二抗或抗抗体，通常为抗IgG抗体)，该抗体与已和固相抗原结合的抗原-抗体复合物上的抗体分子再特异性结合，洗涤去除过量的未结合酶标二抗，加入底物，酶催化生成显色产物，显色深浅与标本中ANA浓度成正比。依据ANA标准品制作标准曲线即可进行ANA定量检测。

检查前晚上8时后避免进食和剧烈运动，保持充足睡眠，静坐15分钟后，肘静脉采血2~3ml。

室温18~25°C2小时内送检，血清于2~8°C冰箱保存，24小时内检测完，否则-20°C保存。冻存血清取出后室温融化，轻轻混匀，勿强烈振摇，不得反复冻融。

脂血或溶血标本为不合格标本，需要重新采集送检，服用完激素或免疫抑制剂治疗时应在申请单上注明。

（一）间接免疫荧光法 

1.参见间接免疫荧光法检测抗角蛋白抗体注意事项。

2.荧光模型对特异性自身抗体的推断及相关自身免疫性疾病的诊断具有指导价值，如抗着丝点抗体、抗高尔基体抗体等，经验丰富的技术人员可依据荧光模型初步判断抗体的类型。但有些荧光模型为两种或两种以上抗体混合的表现模型，如抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体均表现为均质型荧光模型;抗Sm抗体和抗U1RNP抗体(又称抗nRNP抗体或抗RNP抗体)均表现为颗粒型荧光模型。因此，原则上不能以荧光模型作为某种自身抗体的报告，必须进一步采用纯化抗原进行抗体确认，才能提供明确的自身抗体类型报告。

（二）ELISA法 

(1)方法学特点: ELISA法操作简单快速、客观、易于自动化和检测大量标本，连续变化的吸光度值可以估计患者体内ANA的水平，但其缺点是不能了解自身抗体的细胞内定位。

(2)参见ELISA法“抗环瓜氨酸肽抗体检测”注意事项。

1.溶血标本、高脂血症、微生物污染标本会影响最后检测结果。

2.对于应用免疫抑制剂治疗的患者，采血应在用药前进行。

3.间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）时，因被检血清中存在不同性质的特异性的ANA，同检测底物靶抗原结合，而呈现形态各异的荧光染色模型。常见的荧光染色模型有下述四种：均质型（homogeneous pattern，H）、斑点型（speckled pattern，S）、核仁型（nucleolar pattern，N）和核膜型（membranous pattern，M）。抗核抗体的荧光图形分类对了解自身免疫性疾病的鉴别诊断具有提示作用，但要明确是哪一亚类的自身抗体，必须作进一步的抗核抗体谱系的检测，不能仅凭荧光核型作出相关自身抗体的判断。