血清总胆固醇(total cholesterol，TC)是指血液中各脂蛋白所含胆固醇之总和，分为酯化型胆固醇(又称胆固醇酯，CE)和游离型胆固醇(FC)，其中CE占60%～70%，FC占30%～40%，健康个体或个体之间两种类型的比例保持稳定。FC在卵磷脂胆固醇酯酰转移酶(LCAT)的作用下形成CE。血清低密度脂蛋白中胆固醇含量最高，其次是高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白，乳糜微粒最低。胆固醇是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜的主要成分，其血清浓度可作为脂代谢的指标。TC测定的参考系统最为完善，其决定性方法为放射性核素稀释-质谱法;参考方法为正己烷抽提L-B反应显色法(ALBK法) ;常规方法为酶法。目前，国内外均推荐酶法作为临床常规测定方法，国内外生产的试剂盒亦采用此法。

（一）酶法(COD-PAP法)

CE被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离脂肪酸(FFA)和游离胆固醇(FC)，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮，并产生过氧化氢(H₂O₂)，再经过氧化物酶(POD)催化，4-氨基安替比林(4-AAP)与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大光吸收位于500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。反应式如下:

（二）正己烷抽提L-B反应显色法

用氢氧化钾(KOH)乙醇液使血清蛋白变性，并使CE水解为胆固醇。加水后用正己烷分溶抽提，可从碱性乙醇液中定量地提取胆固醇(达99.7%)。提取的胆固醇溶液中除少量其他固醇(人血清中约占TC的1%)以外，基本上不含干扰物。故测定结果与放射性核素稀释-气相色谱-质谱法(决定性方法)接近。

抽提液挥发干后，以Liberman-Burchard (L-B)试剂与胆固醇显色。试剂中醋酸与醋酸酐分别是胆固醇的溶剂与脱水剂，浓硫酸既是脱水剂又是氧化剂。生成的绿色产物主要是五烯胆甾醇正离子，最大吸收峰位于620nm处，但随后可变成黄色产物，故须严格控制显色条件。

各种高脂蛋白血症、梗阻性黄疸、肾病综合征、甲状腺功能低下、慢性肾功能衰竭、糖尿病、妊娠；家族性低β脂蛋白血症；甲亢、营养不良、慢性消耗性疾病、严重肝脏损害等。

1.  空腹采静脉血3.0ml（血清或肝素锂抗凝血浆）。

2.  全血室温稳定3小时，血浆／血清常温稳定1天，2～8℃稳定5～7天，－20℃以下可长期保存。

3.  应该避免在过度的肌运动后采血。

（一）酶法(COD-PAP法)

1.  方法学特点:

工具酶的质量至关重要，各生产厂家的CEH和COD的性能，如单位活性比，杂酶含量、缓冲系统和pH等均不尽相间。因此，酶用量不尽相同，应根据实验而定。

2.  定标品:

酶法测定血清TC时，由于血清中大部分是CE，而且血清基质对这项酶促反应有明显影响，故不宜采用纯胆固醇结晶配制的溶液作为定标品，应以准确定值的血清作为标准物质。如用参考方法(ALBK法)定值血清作为定标品，则酶法的测定结果与ALBK法的结果一致。如用胆固醇水溶液做校准，结果比ALBK法略低。

3.  标本类型及稳定性:

血清和血浆(EDTANa₂作抗凝剂)均可供TC测定，但后者结果比前者低3%。国内习惯用血清测定，但如用血浆标本应乘以校准系数1.03或报告单上注明。血清或血浆置密闭瓶内2～8℃保存，TC至少稳定1个月，－20℃保存至少稳定1年。

（二）正己烷抽提L-B反应显色法

1.  方法学特点

①本法与美国国家标准与技术研究院( NIST)的决定性方法的测定值间比较偏差不超过1%，几份参考血清采用本法、高效液相色谱法、放射性核素稀释-质谱法及气相色谱法测定结果基本一致;②本法现在主要用于参考血清或定标品的定值，方法学评价、试剂鉴定及其他准确测定的需要。

2.  “分析前”各个环节的质量控制对于血脂的分析尤为重要。

（1）受检者(体检对象或患者)的准备

受检者应保持平常的生活和饮食习惯。虽然美国胆固醇教育计划(NCEP)建议初筛时总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇可以用非空腹标本，但血脂测定往往成套进行，建议用空腹标本，一般清晨空腹采血。24小时内不饮酒，以免影响甘油三酯水平。对于体检对象，应在抽血前2周内保持平常的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况发生。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月查血，才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压药、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等。在查血以前，应根据所用药物的特性，停止用药数天或数周，否则应记录有关用药的情况。个体血脂水平随季节变动，体检对象及前瞻性观察者应每年在同一季节进行检查。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

（2）静脉采血

除非是卧床的患者，一般取坐位采血。体位影响水分在血管内外分布，因此影响血脂水平。例如站立5分钟可使血脂浓度提高5%，15分钟可提高16%，故在抽血前应至少静坐5分钟。一般采取肘静脉取血，也可取其他臂静脉。止血带的使用时间不可超过1分钟，穿刺成功后应立即松开止血带，然后抽血。静脉阻滞5分钟可使总胆固醇增高10%～15%。

（3）抗凝剂

我国通常采用血清作血脂分析，如用血浆，一般采用EDTA-Na₂抗凝(1mg/ml)。血浆总胆固醇和甘油三酯水平比血清中约低3%，EDTA浓度越高，血浆血脂水平下降程度越大;但肝素抗凝不影响血浆中血脂水平。

（4）标本处理

标本应尽快送检，室温下放置30～45分钟后离心，分离血清。放置时间不得超过3小时。血清分离后必须吸出，转移至有盖小试管中，以防水分挥发。如当天不能测定，可暂存放于4℃冰箱中，至少可稳定4天。如需长期保存，可低温保存。用作总胆固醇测定标本，－20℃保存即可;用作甘油三酯、脂蛋白、载脂蛋白测定标本，最好保存在－70℃。标本不要反复冻融。

2.  分析性能

①按CDC手册及所规定的仪器操作时，熟练的分析工作者能一定时期内达到精密度(标准差) 0.02g/L (样品胆固醇浓度在1g/L时RSD ≤2%，≥2g/L时RSD≤1%) ;②本法的“可转移性”研究已由CDC组织14个合作单位进行，应用胆固醇含量为1.33～3.59g/L的混合血清时，所得室内CV＜1.5%，室间CV＜3.0%;③本法可用于测定血清、血浆或其他体液中的TC。如L-B试剂制备恰当，血清中胆固醇测定范围可达5g/L，改变抽提液用量可以扩大测定范围，L-B试剂用量减半可使灵敏度提高l倍，用于测定低浓度胆固醇(如HDL-C)时，不会牺牲可靠性或线性。

3.  试剂质量

要重视试剂质量，L-B试剂必须无水，浓硫酸与醋酸酐的质量十分重要。胆固醇结晶可采用我国的一级标准GBW09203 a (纯度99.8%± 0.1%)。对仪器应按规定作鉴定后使用。CDC提供的参考血清采用此法定值。

（一）酶法(COD-PAP法)

胆红素＜410μmol/L;血红蛋白＜7g/L;TG＜28.5mmol/L时，对结果无明显干扰。抗坏血酸与甲基多巴血中浓度高于治疗水平时，导致结果偏低。血清中多种胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色。正常人血清中非胆固醇甾醇约占TC的1%，故在常规测定时这种影响可以忽略不计。