致敏原有吸入性和食入性两大类。吸入性致敏原主要有植物花粉、螨虫、真菌、屋尘、昆虫,以及动物的上皮、毛、唾液、尿液等。花粉种类繁多,分为树木、牧草、杂草等花粉,由于不同地域的植物及其开花季节的差异,花粉播散有明显地域性和季节性特点,因此,花粉致敏引起的AR亦具有明显的地域性和季节性,是季节性变应性鼻炎(seasonal allergic rhinitis,SAR)最主要的致敏原。螨虫广泛分布于自然界,与人类生活关系密切,种类有屋尘螨、粉尘螨、热带螨等,夏、秋季繁殖,是常年性变应性鼻炎(perennial allergic rhinitis,PAR)最常见的致敏原。真菌在自然界中分布极广,其孢子和菌丝等是重要的致敏原。屋尘之所以具有致敏性是因为其含有动物上皮脱屑、螨虫和昆虫的排泄物及脱屑、真菌、细菌、花粉及工业颗粒等。空气中除有大量植物花粉外,也有多种昆虫脱屑物和排泄物飘散在其中,例如蟑螂、飞蛾、蜜蜂、蚊蝇等均具有致敏性。近年,由于喂养宠物如狗、猫和兔等,使因动物源性致敏的发病率也明显升高。食入性致敏原主要有蛋白质含量较高的食品(如牛奶、鸡蛋、花生、豆类等)、肉类(如牛、羊肉等)及海产类食物(如海蟹、虾、鱼、海贝等)。此外,还有蘑菇以及保鲜食品、冷藏食品和人工合成饮料中的食物添加剂、防腐剂和调味剂等,亦逐渐成为现代生活中重要的致敏原。
目前,临床上致敏原检测的方法是皮肤试验(体内法)和血清特异性IgE抗体检测(体外法),这两种方法通常相辅相成、互为益彰。
致敏原皮肤试验的原理是致敏原与皮肤表皮或真皮中的肥大细胞接触后,引起后者脱颗粒释放组胺为主的炎症介质,组胺刺激神经末梢,通过轴索反射释放神经肽类物质,炎症介质和神经肽引起局部血管扩张、渗出和组织水肿,在皮肤局部表现为风团和红晕。
致敏原皮肤试验方法有四种:皮肤斑贴试验、皮肤划痕试验、皮内试验和皮肤点刺试验。皮肤斑贴试验主要用于外源性接触性皮炎的致敏原检测;皮肤划痕试验重复性差,且易产生全身反应,已很少使用;皮内试验属经典方法,敏感度最高,但有全身反应风险,现在仅用于低度敏感的患者;皮肤点刺试验(skin prick tests,SPT)简便、快捷、廉价、安全和高敏感性,而且可让有心理负担的患者亲眼看到结果,是欧洲变态反应和临床免疫学会,以及美国变态反应、哮喘和免疫联合会推荐的方法,也是目前临床诊断和研究IgE介导的变态反应疾病的主要检查手段(图1)。

图1变应原皮肤点刺试验
SPT对吸入性致敏原过敏者是首选的筛查方法,但对食物致敏原过敏者则不推荐为首选,因为目前食入性致敏原制剂还未能做到纯化和标准化,结果远不及吸入性致敏原可靠。对食入性致敏原,建议采用血清特异性IgE检测,或者用新鲜食物点刺,结果更可靠。职业性鼻炎者,除高分子化合物如乳胶或谷粉尘外,点刺试验结果也不可靠。这里,以下介绍SPT步骤、结果判定和相关事项。
1. 步骤
使用标准化变应原是进行安全、高效致敏原检测的保证。检测部位是前臂掌侧皮肤,拟检测的皮肤应干燥和干净,并经乙醇消毒(图2)。检测步骤及顺序是:①在检测部位贴上标有编号的透明胶带,每个编号间隔2cm;②将测试的各种变应原溶液按拟定的编号顺序依次滴于编号两侧,最后滴阳性对照溶液(组胺)和阴性对照溶液(生理盐水)(图3);③用直径1mm标准点刺针在溶液滴上垂直刺入真皮层,用力轻柔而均衡,持续1秒后垂直拔出,以不出血为准,点刺顺序为变应原最先,继之是组胺(阳性对照),最后是生理盐水(阴性对照)(图4);④用柔软的纸吸除多余的溶液(图5);⑤15分钟后判定并记录结果(图6)。为了避免不同变应原掺和影响结果的准确性,点刺时应“一液一针”,且务必防止相邻液滴互相混合。

图275%乙醇溶液消毒前臂掌侧皮肤

图3在前臂掌侧皮肤滴变应原及阳性和阴性对照溶液

图4用点刺针行皮肤点刺

图5吸除多余的变应原溶液和阴、阳对照溶液

图615分钟后观察结果
2. 结果判定
按照通用的标准,点刺部位皮肤出现风团或红晕直径(S)大于阴性对照(生理盐水)3mm为阳性。采用“皮肤指数”记录阳性反应的程度,并进行分级。方法:用直尺测量风团或红晕最小横径d和最大横径D(图7),取其平均数。将风团或红晕的边界用圆珠笔勾画在皮肤上,再用透明胶带进行拓取,并将拓取的结果转移到记录纸上。

图7测量致敏原阳性的风团直径
皮肤指数(SI)=变应原风团直径(S1)/组胺风团直径(S2)。正常:“0”= 阴性;一级:“+”=SI<0.5;二级:“++”= 0.5≤SI<1.0;三级:“+++”= 1.0≤SI<2.0;四级:“++++”= SI<2.0。
SPT阳性,提示体内存在与致敏原特异性IgE结合的肥大细胞,但是否具有临床意义,还需结合临床症状和体征,以及血清特异性IgE检测进行最终判断。若SPT为阳性,且与临床症状、体征相符,则对诊断具有意义,则不需行血清特异性IgE检测。若不相符,则需进一步行血清特异性IgE检测才能作出最终诊断。
3. 安全性和注意事项
采用标准化变应原进行SPT是比较安全的。据世界卫生组织(WHO)SPT指导文献认为,SPT发生全身反应(例如过敏性休克等)是极其罕见的,但有花生、乳胶和牛奶在点刺试验后引发严重过敏反应的报道。因此WHO建议,SPT应由接受过专门培训的专科医师进行,并要求诊室必须配备良好的抢救设备,特别是要配备如肾上腺素(1mg/ml)等抢救药物,以急救可能出现的严重过敏反应。若出现局部皮肤瘙痒,只需给予抗组胺药治疗即可。
SPT需注意以下事项:①婴幼儿和年迈者皮肤反应性弱,不主张接受SPT;②SAR者在不同季节的SPT结果可能出现波动;③SPT前应详细了解用药史和过敏史,试验前至少3天禁用含有抗组胺成分的药物,试验前一天不应口服糖皮质激素,点刺试验部位的皮肤若使用过糖皮质激素油膏也可能影响结果;④欲行点刺的手臂皮肤出现异位性皮炎时,可能出现假阳性反应,可代之在背部皮肤行点刺试验,或待皮炎缓解后进行;⑤当阴性对照(生理盐水)出现阳性结果时,可能是皮肤划痕症,判定结果必须减去阴性对照的直径;⑥急性过敏者、对某物质高度敏感者、不稳定型哮喘者和孕妇不应接受SPT。
IgE是介导Ⅰ型变态反应的抗体,因此检测血清IgE对AR诊断和确定致敏原很有价值。与SPT较高的灵敏度相比,血清IgE检测则有较好的特异性。
血清IgE检测分为血清总IgE和特异性IgE两种。正常人血清总IgE水平从出生起逐渐增加,直到青少年时期后慢慢下降,在20~30岁时趋于平稳。成人血清总IgE水平超过100~150 KU/ L被视为不正常。然而,发生在身体各部位的变态反应疾病和寄生虫病均可导致血清总IgE水平升高,且其他因素(例如种族)也可以使血清总IgE水平升高,因此血清总IgE水平升高对于AR诊断意义不大。但血清特异性IgE则是针对某种致敏原而产生的,因此特异性IgE水平升高不仅提示AR,更重要的是提示了致敏原,从而具有较强的诊断性。
1. 方法
血清特异性IgE检测的方法很多,目前主要有以下4种:
(1)放射致敏原吸附试验(radioallergosorbent test,RAST):
其原理是将致敏原结合到固定相,加入待测血清及参考对照,血清内的致敏原-特异性IgE将吸附在固定相上,再用放射性同位素标记的抗IgE二抗来检测血清中的特异性IgE。此检测需要时间长,放射性同位素易过期,且污染环境和费用高,已逐渐被CAP(测定帽)致敏原检测法所代替。
(2)CAP致敏原检测法:
是目前国际上广泛应用、并公认较为可靠的致敏原定量体外检测方法。主要原理和酶联免疫荧光测定法(fuorescentenzyme immunoassay,FEIA)相同。具有代表性的是瑞典Pharmacia体外抗原测定系统(UniCAP),包括吸入组的Phadiatop和食入组的fx5E,其中Phadiatop包含了空气中常见的90%以上的吸入性致敏原,而fx5E包含卵白蛋白、牛奶、鱼、小麦、花生、黄豆等多种食入性致敏原,该系统是先行混合致敏原过筛试验,阳性者再进一步作单一致敏原特异性IgE定量测定。此系统可进行嗜酸粒细胞阳离子蛋白(eosinophil cationic protein,ECP)检测。
(3)体外试剂盒检测:
它属于快速检测特异性IgE的商用试剂盒,临床应用也较广。其中,德国MEDIWISS公司生产的AllergyScreen系统,是半定量免疫印迹实验。此方法特异性和敏感性高、操作简便、快捷、用血量少、不需特殊仪器,但价格较昂贵。
(4)蛋白芯片技术检测特异性IgE:
近年来,渐趋成熟的蛋白质芯片技术因其高通量、微型化和平行性检测等优点,正越来越多地应用于药物筛选、蛋白质组研究、肿瘤标记物筛查及临床检测等领域,被看作是最具前景的诊断工具。目前蛋白芯片也应用于致敏原的检测,但广泛应用于临床仍然有很多问题有待解决。
2. 结果判定及意义
结果判定应依据所使用的方法作出。
(1)Pharmacia公司CAP系统将结果分为0~6级。0级 :<0.35KU/L ;1级:0.35~0.70KU/ L;2级:0.71~3.5KU/L;3级:3.6~17.5KU/L;4级:17.6~50KU/L;5级:51~100KU/L;6级:>100 KU/L。
(2)MEDIWISS公司AllergyScreen系统的浓度分级也是0~6级。0级:<0.35IU/ml;1级:0.36~0.75IU/ml;2级:0.76~3.5IU/ml;3级:3.6~17.5IU/ml;4级:17.6~50IU/ml;5级:51~100IU/ml;6级:>100IU/ml。浓度分级>2级者为阳性。为了适应中国市场,该系统的还建立了中文方式表达的浓度分级,即0~6级分别为无、低、增加、显著增加、高、较高和极高,“增加”及以上者为阳性。
血清特异性IgE检测的结果(IgE水平升高)与临床表现有较高的相关性,对变应性疾病和非变应性疾病的鉴别性强。由于可能出现假阳性和假阴性结果,因此临床上,无论结果是阳性还是阴性,都应结合临床症状和体征作出诊断。
研究表明,皮肤点刺试验和血清特异性IgE检测之间具有明显的相关性。因此可以肯定地说,两种方法对AR诊断均有价值。两种方法各有优缺点,皮肤点刺试验快速、经济、操作简易和敏感性强,但易受药物等因素的影响,且有一定风险。血清特异性IgE测定特异性高、安全、结果可靠,且不受药物干扰,但费用较高和检测时间相对长。
以下情况建议选择血清特异性IgE检测:①对致敏原极度敏感,或既往有危险性变应史者(例如血管性水肿和喉水肿);②皮肤异常,如严重皮肤划痕症者;③近期内使用过干扰皮肤反应的药物;④对皮肤点刺试验恐惧或不合作者;⑤正处在严重过敏反应状态者;⑥婴幼儿和年迈者;⑦妊娠者;⑧曾行皮肤点刺试验可疑或免疫治疗效果欠佳欲进一步确诊致敏原者;⑨欲行免疫治疗或检验免疫治疗效果者。
两种方法的优缺点如表1。
表1血清IgE检测和皮肤点刺试验的优缺点比较
